将有机官能团通过化学反应共价键合到硅胶表面的游离羟基上而形成的固定相称为化学键合相。这类固定相的突出特点是耐溶剂冲洗，并且可以通过改变键合相有机官能团的类型来改变分离的选择性。

　　
目前，化学键合相广泛采用微粒多孔硅胶为基体，用烷烃二甲基氯硅烷或烷氧基硅烷与硅胶表面的游离硅醇基反应，形成Si-O-Si-C键形的单分子膜而制得。硅胶表面的硅醇基密度约为5个/nm2，由于空间位阻效应（不可能将较大的有机官能团键合到全部硅醇基上）和其它因素的影响，使得大约有40~50%的硅醇基未反应。

残余的硅醇基对键合相的性能有很大影响，特别是对非极性键合相，它可以减小键合相表面的疏水性，对极性溶质（特别是碱性化合物）产生次级化学吸附，从而使保留机制复杂化（使溶质在两相间的平衡速度减慢，降低了键合相填料的稳定性。结果使碱性组分的峰形拖尾）。为尽量减少残余硅醇基，一般在键合反应后，要用三甲基氯硅烷(TMCS)等进行钝化处理，称封端（或称封尾、封顶，end-capping），以提高键合相的稳定性。另一方面，也有些ODS填料是不封尾的，以使其与水系流动相有更好的"湿润"性能。

由于不同生产厂家所用的硅胶、硅烷化试剂和反应条件不同，因此具有相同键合基团的键合相，其表面有机官能团的键合量往往差别很大，使其产品性能有很大的不同。键合相的键合量常用含碳量(C%)来表示，也可以用覆盖度来表示。所谓覆盖度是指参与反应的硅醇基数目占硅胶表面硅醇基总数的比例。

pH值对以硅胶为基质的键合相的稳定性有很大的影响，一般来说，硅胶键合相应在pH=2~8的介质中使用。

　　
化学键合相按键合官能团的极性分为极性和非极性键合相两种。

常用的极性键合相主要有氰基(-CN)、氨基(-NH2)和二醇基(DIOL)键合相。极性键合相常用作正相色谱，混合物在极性键合相上的分离主要是基于极性键合基团与溶质分子间的氢键作用，极性强的组分保留值较大。极性键合相有时也可作反相色谱的固定相。

常用的非极性键合相主要有各种烷基(C1~C18)和苯基、苯甲基等，以C18应用最广。非极性键合相的烷基链长对样品容量、溶质的保留值和分离选择性都有影响，一般来说，样品容量随烷基链长增加而增大，且长链烷基可使溶质的保留值增大，并常常可改善分离的选择性；但短链烷基键合相具有较高的覆盖度，分离极性化合物时可得到对称性较好的色谱峰。苯基键合相与短链烷基键合相的性质相似。

另外C18柱稳定性较高，这是由于长的烷基链保护了硅胶基质的缘故，但C18基团空间体积较大，使有效孔径变小，分离大分子化合物时柱效较低。

　　
分离中等极性和极性较强的化合物可选择极性键合相。氰基键合相对双键异构体或含双键数不等的环状化合物的分离有较好的选择性。氨基键合相具有较强的氢键结合能力，对某些多官能团化合物如甾体、强心甙等有较好的分离能力；氨基键合相上的氨基能与糖类分子中的羟基产生选择性相互作用，故被广泛用于糖类的分析，但它不能用于分离羰基化合物，如甾酮、还原糖等，因为它们之间会发生反应生成Schiff碱。二醇基键合相适用于分离有机酸、甾体和蛋白质。

分离非极性和极性较弱的化合物可选择非极性键合相。利用特殊的反相色谱技术，例如反相离子抑制技术和反相离子对色谱法等，非极性键合相也可用于分离离子型或可离子化的化合物。ODS(octadecylsilane)是应用最为广泛的非极性键合相，它对各种类型的化合物都有很强的适应能力。短链烷基键合相能用于极性化合物的分离，而苯基键合相适用于分离芳香化合物。

另外，美国药典对色谱法规定较严，它规定了柱的长度，填料的种类和粒度，填料分类也较详细，这样使色谱图易于重现；而中国药典仅规定填料种类，未规定柱的长度和粒度，这使检验人员难于重现实验，在某些情况下还浪费时间和试剂。

色谱柱固定液英汉对照

阿皮松（真空润滑脂）....................Apeizon-
八（2-羟内基）蔗糖..............HyproseSP-80
苯磺酸钠乳化剂............................Otonite-
苯喹啉...........................7.8-Benzoquinoline
苯乙腈.................................Bebzylcyanide
苄基联苯..................................Benzyldiphenyl
丙烷壬酸三甲酯（纤烷丝酯）..........Celanese Ester No.9
NN-一,二（2氰乙基）甲酰胺...........N,N-Bis-(2cyanoethyl)formamide(BCEF)
N,N-一,二甲基硬脂酸酰胺（混以十四十六烷碱）.............Hallcomiol
M- 二甲基双十八烷基皂士.......................Bentone34
癸二腈...........................Sebaconitrile
癸二酸二（2-乙氧基乙）酯.........Bis-(2-ethoxyethyl)Sebacate.BEES
癸二酸二辛酯..................Dioctyl Sebacate(DOS)
环氧树脂....................EPON-
已二酸二(2-甲氧基乙)酯.........Bis-(2-moethoxyethyl)adipate(bmea)
已二酸二(2-乙氧基乙)酯.........Bis-(2-moethoxyethyl)adipate(bmea)
甲基硅氧烷与聚乙醇丁二酸共聚物...................ECSS-X
甲基三氧苯基(10%)硅氧烷....................VersilubeF-50
甲基硅油(甲基硅氧烷).....................OV-
角鲨烷..........................Spulane
角鲨烯.....................Squlene
季戊四醇四氰乙醚...........Tetracyanoethylantedpenterythriyriol(tcepe)
聚1,4-丁二醇丁二基酸酯...............Butanel,1,4-diolsuceinate(BDS)
聚乙烯基吡咯烷酮.....................Polyinylpyrrolidone(PVP)
聚苯基二乙醇胺丁二酯..............Phenyldiethanolqninesuccinate(PDEAS)
聚苯醚................................Polyhenylether
聚苯醚砜...............................Poly-S-
聚丙二醇已二酸酯........................Roplex400
聚二乙二醇丁二酸酯...........Dienthyeneglycolsuccinate(DECS,LAC-3R-728)
聚二乙二醇已二酸酯...........Dienthyeneglycoladipate(DEGA,LAC-1R-296)
聚环已烷二甲醇丁二酸酯..........Cyclohexanedimetheanolsuccinate(CHDMS)
聚三氟氟乙烯油......................................Kel-FOil#10
聚碳硼烷甲基硅氧烷.......................Dexsil-
聚烷撑二醇.....................................UCON-
聚酰胺............................Poly-A-
聚新戊二醇丁二酸酯.................Neeopentylglyol succinate(NGS)
聚亚酰胺110....................................Poly-110-
聚乙二醇..........................Carbowax-,PEC-
聚乙二醇20M与2-硝基对苯二甲酸反应物..................EfFAP,OV-351..
聚乙二醇20M与对苯二甲酯反应物..................Carbowax20M-TPA
聚乙醇单硬脂酸脂.................................Ethofat60/25
聚乙二醇丁二酸脂...............Ethyleneglycol succinate(EGS,LAC-4-R866
聚乙二醇已二酸脂....................Ethyleneglycol adipate(EGA)
聚乙二醇壬基苯基醚......................Lgepal CO
邻苯二甲酸二三(2-丁氧基乙)酯.................Bis(2-butoxyethyl)phthalan
邻苯二甲酸二癸酯..........................DI-N-decylphthalate(DDP)
邻苯二甲酸二壬酯............................Dinonylphthalate(DNP)
邻苯二甲酸二辛酯........................Diocyl phthalate(DOP)
邻苯二甲酸二(2-乙基已)酯.....................Bis(2-ethylthexyl)phthalate
邻苯二甲酸二异癸酯.................Diisodecyl phthalate(DDP)
磷酸邻三甲苯酯..............................Tricresyphosphate.
β,β一硫代二丙腈....................β,β-Thiodipripionitrile(TDPN)
碳油.....................................Halocarbonoit-
马来酸二正丁酯.......................Di-n-butylmaleate(DBM)
1-羟基-2十七碳烷基噗唑啉...........................Amine-220
氰丙基苯基硅氧烷.............................Silar-
氰乙基甲基硅氧烷与聚乙二醇丁二酸酯共聚物....................ECNSSM.
曲拉通..............................................Triton
1、2、3-三(2-氰乙氧基)丙烷..........1.2.3-Tris-(2-Cyanothoxy)pronane(TGEP)
三氟丙基(50%)甲基硅氧烷.............................QF-
三乙醇胺...............................Triethanolamin.e
山梨糖醇......................................Sorbitol
双甘油..........................Diglycerol
四(2-羟乙基)乙二胺.............Tetrahydroxyethyl ethylenediamine(THEND)
四乙二醇二甲醚T.......................eraethylene gycol dimethyl ether
β-β-氧二丙腈....................β,β-Oxydipropionitrile(ODPN)
液体石蜡...................................Nujo
液晶..................................BMBTBMBI
有机皂士...........................-34Bentone34
正十六烷...........................n-Hexadecath
聚酰胺树脂............................Versamid900
聚新戊二醇已二酸酯...................Neeopentyl glyol adipate(NGA