急性细胞排斥反应（ACR）是实体器官移植后最常见的早期免疫排斥反应之一，是移植物衰竭和移植受者死亡的重要危险因素。当前，临床上仍缺乏可靠的无创检测指标用于急性细胞排斥反应的诊断。细胞外囊泡（EVs）广泛参与细胞间通讯，在生理过程和疾病进展中发挥着不可替代的作用，可作为疾病诊断的标志物。此外，来自同一亲本细胞的EV亚群，其物理特性和内容物可能存在差异。目前，EV亚群的分离方法通常基于尺寸、密度和蛋白表达量，掩盖了EV表面蛋白的结构和寡聚状态等信息。当ACR发生时，T细胞膜上的TCR-CD3复合体聚集是CD3构象变化和T细胞激活的必要条件。因此，为了更准确地描述T细胞来源的EV亚群在排斥反应中发挥的作用，并寻找新的急性细胞排斥反应生物标志物，迫切需要更精确的方法来分离T细胞在不同状态下分泌的EVs。

近日，中山大学生物医学工程学院的戴宗教授团队和中山大学附属第三医院肝脏外科暨肝移植中心的杨扬教授团队合作，首次提出了一种基于核酸适配体修饰纳米金的卡尺策略，成功实现了结构异质的TCR-CD3单体和二聚体EV亚群的分离和异质性分析。

作者通过构建小鼠急性细胞排斥反应模型，从小鼠血浆中分离得到了两个T细胞来源的EV亚群，并对其进行了表型鉴定和测序分析。结果表明：TCR-CD3二聚体EVs的CD3表达量更多，颗粒尺寸更大。在TCR-CD3单体EVs表达上调的11个microRNAs中，有7个被报道在发生ACR的患者中与免疫激活和促进炎症反应相关，其靶基因在T细胞激活和免疫系统的细胞因子信号中显著富集。该结果提示TCR-CD3单体EVs是ACR潜在的无创检测标志物，并为基于蛋白寡聚状态区分EV亚群提供了有效参考。

该卡尺策略为解构EV亚群的异质性开辟了新的方向，有望通过改变卡尺探针的序列和间距应用于更广泛的蛋白质异构EV亚群研究。