分享一篇发表在Cell Chemical biology上的通讯文章The interaction between NLRP1 and oxidized TRX1 involves a transient disulfide bond。文章的通讯作者是来自美国纪念斯隆·凯特琳癌症中心的Daniel A. Bachovchin，他们组主要利用化学和细胞生物学方法研究先天免疫。
NLRP是一种先天免疫受体，可以在检测到病原体相关的信号后组装成炎症小体病导致后续的炎症反应以及细胞死亡过程。在作者的前期工作中，先后发现了在抑制DPP8/9后NLRP1b会发生N端降解并被激活，而氧化态的TRX1蛋白则能够通过和NLRP1直接结合来抑制炎症小体激活。还原态TRX1一般会先通过C32和目标底物反应形成分子间二硫键，之后C35攻击二硫键来还原底物并使自身变成氧化态。在本文中，作者利用系统的实验来说明NLRP1和氧化TRX1之间的相互作用涉及到由瞬态二硫键。
首先，作者使用了AlphaFold-Multimer来预测了NLRP1和TRX1之间的相互作用结构，并在其中发现人NLRP1的C427处在TRX1的两个关键催化残基C32和C35附近，可能暗示俩者之间瞬态二硫键的存在。于是，作者过表达了NLRP的C427S突变体和几个其他对照半胱氨酸突变体，IP看其相互作用蛋白的差别，发现仅C427S的突变体导致TRX1的相互作用减少，说明这一相互作用于依赖于C427。之后，作者使用IAA或者NEM两种试剂来在非变性胶上捕捉二硫键形式相互作用的NLRP1-TRX1复合物。在不使用IAA和NEM时，非变性胶上无法看到两者复合物的存在，说明这种复合物是不稳定的；但是在加入IAA或者NEM后，能够在胶上看到明显的复合物条带。此外，在DTT等氧化还原状态的扰动下，复合物的相对信号也产生了相应变化，C427S突变体也无法产生复合物条带。这些实验在鼠源NLRP1b的相应半胱氨酸C225上也得到了证实。最后，他们将复合物用NEM标记、IP、非变性胶分离后切割复合物条带，在经过或者不经过DTT还原的情况下再进行IAA标记和后续质谱鉴定，发现只有C427在经过DTT后被IAA标记更多，说明它在复合物中以二硫键的形式存在。这一结果说明了NLRP1 C427和氧化态TRX1 C32的确生成了瞬态二硫化物。
总之，作者在利用多种实验揭示了NLRP1和氧化态TRX1之间的相互作用分子机制，进一步将细胞氧化还原状态和先天免疫联系在了一起。
本文作者：MYZ
责任编辑：LYC
原文链接：https://www.cell.com/cell-chemical-biology/fulltext/S2451-9456(23)00469-5
文章引用：10.1016/j.chembiol.2023.12.012
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